当期目录

2016年 第11卷 第3期    刊出日期：2016-06-28

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论著

新生隐球菌通过S100A10活化尿激酶-纤溶酶系统侵袭血脑屏障的机制研究

邱天文, 朱红梅, 温海

2016, 11(3):  129-134. 

摘要 ( 585 )   PDF (1007KB) ( 941 )  

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目的 验证隐球菌可以上调脑微血管内皮细胞S100A10基因来活化尿激酶-纤溶酶系统，从而更易穿过血脑屏障。方法 ①将小鼠脑微血管内皮细胞bEnd.3和新生隐球菌B3501共孵育，检测加菌的实验组和不加菌对照组S100A10、UPA基因和蛋白的表达量。②用慢病毒感染血管内皮细胞，比较S100A10基因正常组和沉默组的S100A10和UPA基因和蛋白的表达量。③构建Transwell血脑屏障模型，比较S100A10基因正常组和沉默组隐球菌通过的差异性，用底物显色法检测尿激酶-纤溶酶系统的相关活化情况。结果 ①新生隐球菌B3501和bEnd.3共孵育，Real-time PCR显示S100A10和UPA的mRNA高表达；Western-blot显示S100A10目的蛋白和UPA蛋白高表达。②沉默S100A10基因后，S100A10和UPA基因及蛋白表达分别受到抑制。③隐球菌添加到Transwell体外血脑屏障模型中，S100A10基因未沉默组通过血脑屏障的隐球菌数量比S100A10基因沉默组多，尤其是8 h、16 h、24 h，两组差异有统计学意义，P<0.05；未沉默S100A10基因的对照组的纤溶酶原和尿激酶的活化程度高于沉默S100A10基因的实验组，其中纤溶酶原在8 h、16 h、24 h，尿激酶在16 h、24 h，两组差异有统计学意义，P<0.05。结论 隐球菌能同时使内皮细胞S100A10基因、UPA基因的高表达，活化尿激酶-纤溶酶系统，提高其通过血脑屏障的能力。

秀丽隐杆线虫-白念珠菌感染模型用于抗真菌药效评价的研究

毕爽, 胡淦海, 胡丹丹, 姜远英, 王彦

2016, 11(3):  135-139. 

摘要 ( 825 )   PDF (914KB) ( 1377 )  

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目的 观察秀丽隐杆线虫-白念珠菌感染模型用于抗真菌药效评价的可靠性和稳定性，评价该模型在抗真菌药物研发中的应用价值。方法 使线虫吞食白念珠菌造成致死性感染，建立线虫-白念珠菌感染模型，选用4种临床常见的抗真菌药物（氟康唑、两性霉素B、卡泊芬净和5-氟胞嘧啶）和白念珠菌群体感应分子法尼醇对感染后线虫进行治疗，观察线虫存活状态，记录生存率从而评价抗真菌药效。结果 白念珠菌感染线虫后生成菌丝穿破线虫体表造成线虫死亡。氟康唑、卡泊芬净和5-氟胞嘧啶治疗后线虫体内白念珠菌菌丝生长呈现不同程度的抑制状态，线虫生存率有提高且存在量效关系。两性霉素B在该模型中也表现出了明显的体内抗真菌作用，但16 μg/mL、32 μg/mL的高浓度两性霉素B表现出毒性。法尼醇能够抑制线虫体内白念珠菌菌丝形成，但对线虫保护作用较弱。结论 秀丽隐杆线虫-白念珠菌感染模型用于体内抗真菌药效评价方法可靠，并具有通量高、成本低、周期短等优点，值得推广应用。

原生质体介导马尔尼菲青霉基因转化体系的优化

陈春梅, 冯姣, 陈志文, 肖星, 蒋敏敏, 史茗岚, 贺莉雅, 蔡文莹, 席丽艳, 李希清

2016, 11(3):  140-144. 

摘要 ( 781 )   PDF (905KB) ( 981 )  

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目的 优化原生质体介导的马尔尼菲青霉转化体系，为其基因功能研究提供良好的平台。方法 通过原生质体介导将构巢曲霉（Aspergillus nidulans）pyrG基因插入马尔尼菲青霉尿嘧啶缺陷株ligD（pyrG-，ligD-）中，在不含尿嘧啶的培养基中筛选阳性转化子，运用PCR验证重组子，通过改变影响转化效率的酶解时间、培养基浓度、质粒浓度、不同配方的原生质体洗涤液STC和不同配方的原生质体助融剂PTC 5个条件对体系进行优化。结果 PCR验证A.nidulans pyrG基因成功的插入ligD中，转化子可稳定传代。最适合ligD原生质体转化效率的条件为：酶解时间6 h，PTC（60%PEG-4000，100 mmol/L Tris-HCl pH8.0，100 mmol/L CaCl₂），每100 μL原生质体（10⁶~10⁷/mL）加入2.5 μg质粒，0.6 mol/L蔗糖SD/SDU筛选/再生培养基，每1 μg质粒转化子可达68个左右。结论 成功优化了原生质体介导马尔尼菲青霉转化体系的条件，优化后该方法转化效率高，为基因功能研究提供良好平台。

非免疫抑制患者内源性土曲霉眼内炎1例及实验研究

赵颖, 王澎, 孙宏莉, 杨启文, 王瑶, 王贺, 徐英春, 赵玉沛

2016, 11(3):  145-148. 

摘要 ( 669 )   PDF (989KB) ( 1000 )  

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目的 报道1例非免疫抑制患者内源性土曲霉眼内炎及实验研究。方法 采集本院收治的1例非免疫抑制内源性眼内炎患者的玻璃体液，进行直接涂片镜检、培养，并进一步对分离到的菌株进行表型分析，分子鉴定及E-test法体外抗真菌药敏试验。结果 直接涂片镜检可见真菌孢子及有隔真菌丝，培养7 d后生长菌落较小，形态不典型，经分子鉴定及多次转种观察形态确定为土曲霉。E-test法测得MIC值（μg/mL）：伊曲康唑0.250，伏立康唑0.125，两性霉素B 2.000。结论 早期诊断性和治疗性玻璃体切割术有利于获得足够的样本用于微生物鉴定，并可以减少玻璃体中微生物量及炎性物质。直接涂片迅速报告镜检结果对临床最初选择抗菌药物有重要意义。对于直接分离自临床标本的形态不典型的丝状真菌，采用ITS序列分析等分子生物学鉴定有助于尽早定种，缩短鉴定时间。

天然产物TS抗念珠菌作用研究

夏晓萍, 叶红, 郑彩虹, 俸春红, 刘龙孝

2016, 11(3):  149-152. 

摘要 ( 590 )   PDF (928KB) ( 1086 )  

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目的 探讨天然产物TS体外抗念珠菌作用。方法 采用微量液基稀释法测定最低抑菌浓度（MIC），琼脂稀释法测定最低杀菌浓度（MFC），透射电镜观察TS对念珠菌超微结构的影响。结果 TS抗白念珠菌的MIC范围0.08~0.32 mg/mL，抗光滑念珠菌MIC范围0.08~0.16 mg/mL，抗热带念珠菌MIC范围0.32~0.64 mg/mL，抗近平滑念珠菌MIC 0.32 mg/mL，抗克柔念珠菌MIC 0.32 mg/mL。对白念珠菌具有杀菌作用，MFC 0.64 mg/mL。透射电镜下可见：细胞壁皱缩、破裂；细胞核异常；细胞质中可见较多空泡状结构；细胞中无完整细胞器结构。结论 TS具有明确的抗念珠菌作用，可使其形态和超微结构发生明显的改变。

舍他康唑对常见临床分离念珠菌属菌株的体外抗菌活性研究

王千, 吴伟伟, 张浩, 万喆, 李若瑜, 王爱平, 刘伟

2016, 11(3):  153-155. 

摘要 ( 658 )   PDF (827KB) ( 808 )  

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目的 了解舍他康唑对常见临床分离念珠菌属菌株的体外抗菌活性。方法 参照美国临床和实验室标准协会（Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI）制定的M27-A3方案测定舍他康唑对112株念珠菌的MIC值。结果 舍他康唑对112株念珠菌在24 h的MIC GM为0.18 μg/mL，MIC范围为≤0.03~16 μg/mL，MIC₅₀和MIC₉₀分别为0.125 μg/mL、1 μg/mL。对念珠菌属各菌种的MIC GM从低到高依次为白念珠菌0.08 μg/mL，光滑念珠菌0.158 μg/mL，近平滑念珠菌0.318 μg/mL，热带念珠菌为0.425 μg/mL，克柔念珠菌为1.414 μg/mL。结论 舍他康唑对常见临床分离念珠菌属菌株均有较好的体外抗菌活性。

利福喷丁对氟康唑体外抗耐药白念珠菌的增效作用

王玉连, 张璐璐, 秦玉璘, 曹永兵, 吴建华

2016, 11(3):  156-159. 

摘要 ( 687 )   PDF (847KB) ( 950 )  

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目的 测定利福喷丁（Rifapentine）对氟康唑（Fluconazole）体外抗耐药白念珠菌的增效作用。方法 参考美国临床实验室标准化委员会（CLSI）的M27-A2方案测定利福喷丁与氟康唑对白念珠菌的最低抑菌浓度（MIC）；利用棋盘式微量液基稀释法测定利福喷丁联合氟康唑体外抗白念珠菌的效果。结果 利福喷丁单药时对实验所用12株白念珠菌均无抗菌活性（MIC₈₀>1 024 μg/mL）。在氟康唑敏感白念珠菌株中，利福喷丁联合氟康唑后未表现出协同效应（FICI>0.5）；在氟康唑耐药白念珠菌中，利福喷丁联合氟康唑后均表现出显著的协同作用（FICI<0.1）。结论 利福喷丁单用无抗白念珠菌活性，但利福喷丁能显著增强氟康唑抗耐氟康唑白念珠菌活性。

1135株临床念珠菌分布特征和药敏结果分析

邓琳, 孔庆涛, 陈军, 桑红

2016, 11(3):  160-165. 

摘要 ( 763 )   PDF (901KB) ( 886 )  

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目的 探讨本院2012年1月~2014年10月念珠菌感染特点及耐药情况，为临床合理使用抗真菌药物提供病原学依据。方法 应用回顾性调查分析的方法，统计本院2012年1月~2014年10月期间送检标本中分离的1 135株念珠菌，并对常用抗真菌药敏试验结果分析。结果 1 135株念珠菌以白念珠菌为主要致病菌，其次为热带念珠菌、光滑念珠菌、近平滑念珠菌、克柔念珠菌；主要来源于老年人，不同年龄分段念珠菌分布有明显差异（P<0.05）；男性多于女性，男、女性别间分布有统计学差异（P<0.05）；以痰标本最多，尿液次之，血液占第3位，不同标本来源分布有明显差异（P<0.05）；念珠菌感染疾病主要来自消化内科疾病和肺部疾病，不同临床疾病类型间有明显差异（P<0.05）；不同念珠菌对氟康唑、伏立康唑、伊曲康唑、两性霉素B的药敏敏感程度具有明显统计学差异（P<0.05），对氟胞嘧啶药敏敏感程度没有明显差异（P>0.05）。结论 本院念珠菌感染最常见的为白念珠菌，其次为热带念珠菌。在治疗老年患者和肺部疾病患者，要警惕发生念珠菌等二重感染，一旦发生，要应及时对送检标本进行真菌培养和药敏试验，合理使用抗真菌药物，减少医院感染、多重耐药和深部真菌感染的发生。

院内深部念珠菌感染菌种分布和耐药性分析

秦晓峰, 王英, 吴建华, 顾军

2016, 11(3):  166-168. 

摘要 ( 631 )   PDF (819KB) ( 876 )  

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目的 了解我院深部念珠菌感染的类型、分布及耐药现状，指导临床用药。方法 采用常规方法分离培养真菌，对我院2012年6月~2014年5月培养出的念珠菌用科玛嘉念珠菌显色培养基和API 20C AUX进行鉴定，同时使用ROSCO纸片扩散法进行药敏试验。结果 共分离出念珠菌2 725株，其中白念珠菌最多（64.73%），其次为热带念珠菌（13.64%）、光滑念珠菌（10.57%）和克柔念珠菌（2.35%）；念珠菌检出构成比以痰液最高（45.39%），其次为中段尿（22.06%）和咽拭子（16.66%）；4种念珠菌对两性霉素B和5-氟胞嘧啶均表现出较高的敏感性。结论 院内深部念珠菌感染仍以白念珠菌为主，念珠菌对两性霉素B和5-氟胞嘧啶的耐药率较低，对唑类药物存在不同程度的耐药。

CLSI M38-A2及M27-A3方案分析足癣36株真菌的药敏特征

卜晓琳, 范娟, 胡晓莉, 蒋建华, 瞿子伟, 顾军

2016, 11(3):  169-173. 

摘要 ( 727 )   PDF (847KB) ( 1103 )  

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目的 探讨氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑、酮康唑、特比萘芬、两性霉素B、咪康唑、5-氟胞嘧啶对36株足癣致病菌的体外抑菌特征。方法 对55例临床疑似足癣患者行真菌镜检、培养和鉴定。分别应用美国临床实验室标准化委员会（Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI）M38-A2和M27-A3方案针对其中的皮肤癣菌和念珠菌，检测8种药物对不同真菌的最低抑菌浓度（Minimum inhibitory concentration，MIC）。结果 镜检及培养均为阳性的真菌36株，计8个菌种：红色毛癣菌、须癣毛癣菌、石膏样小孢子菌、絮状毛癣菌、羊毛状小孢子菌、白念珠菌、光滑念珠菌、克柔念珠菌；属2大类：皮肤癣菌、念珠菌。8种药物对8种真菌的MIC值比较，抑菌效果存在显著差异（P<0.05）。皮肤癣菌和念珠菌2大类比较，除伊曲康唑外（P>0.05），其余7种药物的抑菌效果存在显著差异（P<0.05）。其中，特比萘芬对皮肤癣菌的平均秩次最小。5-氟胞嘧啶对念珠菌的平均秩次最小。结论 上述8种药物的体外药敏实验提示，8种药物对8种真菌的抑菌效果存在显著差异。除伊曲康唑外，其余7种药物对皮肤癣菌和念珠菌的抑菌效果存在显著差异。相对而言，特比萘芬对皮肤癣菌抑菌效果更好，5-氟胞嘧啶对念珠菌抑菌效果更好。

HIV抗体阴性的马尔尼菲青霉菌病患者的易感因素及免疫状态分析

谢雅利, 李园园, 胡成平, 邓彭博, 刘和平, 王琼

2016, 11(3):  174-177. 

摘要 ( 796 )   PDF (1009KB) ( 1125 )  

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目的 对HIV阴性的马尔尼菲青霉菌病患者的易感因素及免疫状态进行分析，以提高该病的临床诊断率。方法 回顾我科确诊的1例HIV阴性播散性马尔尼菲青霉菌病例特点，复习相关文献，以"马尔尼菲青霉菌"为关键词检索万方数据库、中国期刊网全文数据库，以Penicillium marneffei为关键词检索PubMed数据库，总结并分析其易感因素及可能的免疫机制。结果 患者系中年男性，以间断发热、干咳、呼吸困难、多发淋巴结肿大为主要临床特点。肺部影像学示双肺弥漫性病变，外院抗结核治疗无效，我院经皮肺穿刺组织真菌培养及病理诊断为肺马尔尼菲青霉菌病。在以上数据库共检索出2 083篇文献，剔除非相关文献，以及可能重复、资料不全病例，共检索出HIV阴性者91例，其中45例有基础疾病。结论 马尔尼菲青霉菌可发生在于HIV阴性，因结缔组织病、血液系统疾病、器官移植等基础疾病或与真菌免疫相关基因的突变等致使免疫功能受损的患者，与储存宿主接触史、流行区域生活或旅游、环境暴露、气候湿度等易感因素有关，对以上患者应警惕是否为马尔尼菲青霉菌感染，尽早确诊并治疗。

上海地区9566例浅部真菌病患者病原菌分析

朱均昊, 韩德忞, 赵颖, 李莉, 章强强

2016, 11(3):  178-180. 

摘要 ( 741 )   PDF (803KB) ( 973 )  

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目的 了解上海地区浅部真菌病的发病情况及病原菌菌种构成。方法 对2010年1月~2014年12月收集的9 566例浅部真菌病临床标本进行真菌培养及真菌鉴定。结果 在确诊的9 566例浅部真菌病患者中，甲真菌病5 277例（55.16%），体股癣2 313例（24.18%），手足癣1 719例（17.97%），头癣257例（2.69%），患者女性多于男性。在分离的10 078株菌种中红色毛癣菌5 082株（50.43%），念珠菌属2 786株（27.64%），红酵母703株（6.98%）。结论 上海地区浅部真菌病仍以红色毛癣菌为主导，与1994~1998年数据相比较，念珠菌与酵母样真菌比例有明显上升。

清热祛湿药膳方对防治复发性外阴阴道念珠菌病湿热下注证的临床观察

张曾玲

2016, 11(3):  181-184. 

摘要 ( 748 )   PDF (830KB) ( 1268 )  

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目的 探讨清热祛湿药膳方对复发性外阴阴道念珠菌病（recurrent vulvovaginal candicliosis，RVVC）湿热下注证患者阴道微生态环境（乳酸杆菌数量评分）、临床症状和体征评分、临床总疗效等方面的影响，并验证其是否能有效降低复发率。方法 选择120例复发性外阴阴道念珠菌病湿热下注证患者，随机分为实验组和对照组，对照组单用克霉唑阴道片阴道上药，实验组加用清热祛湿药膳口服，强化治疗后再巩固治疗3个月经周期观察其疗程结束后治愈率及停药3个月后的复发率。结果 所有患者在治疗期间，均未出现药物不良反应，两组总疗程结束后，实验组的临床总有效率与对照组比较，差异无统计学意义（P>0.05），但痊愈率优于对照组（P<0.05）；在改善RVVC患者临床症状和体征及阴道念珠菌培养转阴率，实验组优于对照组；在增加乳酸杆菌数量方面，实验组与对照组疗效相当，实验组优势不明显；两组患者停药3个月后远期复发率比较，治疗组低于对照组，即在远期疗效方面治疗组优于对照组。结论 清热祛湿药膳对防治复发性外阴阴道念珠菌病疗效良好。

病例报告

断发毛癣菌所致婴儿脓癣并发癣菌疹1例

唐教清, 庄凯文, 冉昕, 冉玉平

2016, 11(3):  185-186,184. 

摘要 ( 661 )   PDF (1342KB) ( 906 )  

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患儿男，5个月，额部发际处红斑3个月。皮肤科检查：前额发际处大片红斑，相互融合、边界较清，红斑内头发稀疏，个别折断或脱失，毛囊性脓疱及皮下脓肿，经真菌镜检、培养及提取DNA做PCR后测序鉴定，确诊为断发毛癣菌致婴儿脓癣，予口服伊曲康唑（33 mg/d）及外用2%酮康唑洗剂、1%萘替芬-0.25%酮康唑乳膏等治疗。在治疗中出现头面部多发散在环状鳞屑性丘疹及红斑，诊断脓癣继发癣菌疹，加用泼尼松（5 mg/d）口服，改用1%卢立康唑乳膏。抗真菌药物体外药敏试验证实1%卢立康唑乳膏比1%萘替芬-0.25%酮康唑乳膏抗菌活性更强。伊曲康唑治疗9周、泼尼松治疗5周后皮损完全消退，重新长出新发，无瘢痕秃发形成。停药后随访1 a无复发。

阿萨希毛孢子菌局部感染1例

周南, 张立森, 柯海文, 姚尚圣, 夏来启, 沈运彪

2016, 11(3):  187-189. 

摘要 ( 868 )   PDF (858KB) ( 1134 )  

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患者男，44岁，双足3、4趾趾间皮肤溃疡5个月余，逐渐加重。皮肤出现小水疱及皮肤浸渍糜烂，伴轻度瘙痒。真菌镜检及培养结果：阿萨希毛孢子菌。诊断阿萨希毛孢子菌局部感染。给予自体皮移植修复创面，术后10 d痊愈出院。

综述

施慧隐球菌侵袭血脑屏障相关机制研究进展

邱天文, 朱红梅, 温海

2016, 11(3):  190-192,189. 

摘要 ( 377 )   PDF (1330KB) ( 888 )  

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隐球菌是一种环境机会致病菌，能够侵袭宿主中枢神经系统并引起致命性的隐球菌性脑膜脑炎。在隐球菌侵犯血脑屏障过程中，有许多重要的致病因素参与，如荚膜、尿素酶、磷脂酶等。其还可以通过多种途径穿越血脑屏障，造成脑部感染。近年来发现隐球菌还可以利用纤溶酶激活基质金属蛋白酶类，使其穿越血脑屏障。该文就隐球菌侵袭血脑屏障的相关机制研究进展作一综述。