中国真菌学杂志 2016, Vol. 11 Issue (3): 140-144.
陈春梅, 冯姣, 陈志文, 肖星, 蒋敏敏, 史茗岚, 贺莉雅, 蔡文莹, 席丽艳, 李希清
CHEN Chun-mei, FENG Jiao, CHEN Zhi-wen, XIAO Xing, JIANG Min-min, SHI Ming-lan, HE Li-ya, CAI Wen-ying, XI Li-yan, LI Xi-qing
摘要:
目的 优化原生质体介导的马尔尼菲青霉转化体系,为其基因功能研究提供良好的平台。方法 通过原生质体介导将构巢曲霉(Aspergillus nidulans)pyrG基因插入马尔尼菲青霉尿嘧啶缺陷株ligD(pyrG-,ligD-)中,在不含尿嘧啶的培养基中筛选阳性转化子,运用PCR验证重组子,通过改变影响转化效率的酶解时间、培养基浓度、质粒浓度、不同配方的原生质体洗涤液STC和不同配方的原生质体助融剂PTC 5个条件对体系进行优化。结果 PCR验证A.nidulans pyrG基因成功的插入ligD中,转化子可稳定传代。最适合ligD原生质体转化效率的条件为:酶解时间6 h,PTC(60%PEG-4000,100 mmol/L Tris-HCl pH8.0,100 mmol/L CaCl2),每100 μL原生质体(106~107/mL)加入2.5 μg质粒,0.6 mol/L蔗糖SD/SDU筛选/再生培养基,每1 μg质粒转化子可达68个左右。结论 成功优化了原生质体介导马尔尼菲青霉转化体系的条件,优化后该方法转化效率高,为基因功能研究提供良好平台。
中图分类号: