犬小孢子菌FSH1基因干扰载体的构建及验证

中国真菌学杂志　 2020, Vol. 15 　Issue (6): 354-358.

犬小孢子菌FSH1基因干扰载体的构建及验证

张芙蓉¹, 郭春梅², 吴英¹, 谭灿³, 杨国玲⁴

1. 大连市友谊医院皮肤科, 大连 116001;
2. 大连医科大学, 大连 116044;
3. 成都市第二人民医院皮肤科, 成都 610017;
4. 大连医科大学附属第一医院, 大连 116011

收稿日期:2020-03-25 发布日期:2020-12-28
通讯作者: 杨国玲,E-mail:yanggl@medmail.com.cn E-mail:yanggl@medmail.com.cn
作者简介:张芙蓉,女(汉族),博士,副主任医师.E-mail:betty00710449@126.com
基金资助:
国家自然科学基金（81071330）

Construction of RNA interference plasmid targeting FSH1 gene in Microsporum canis and interference efficiency determination

ZHANG Fu-rong¹, GUO Chun-mei², WU ying¹, TAN Can³, YANG Guo-ling⁴

1. Department of Dermatology, Dalian Friendship Hospital, Dalian 116001, China;
2. Department of Biotechnology, Dalian Medical University, Dalian 116044, China;
3. Department of Dermatology, Chengdu Second People's Hospital, Chengdu 610017, China;
4. Department of Dermatology, the 1st Affiliated Hospital of Dalian Medical University, Dalian 116011, China

Received:2020-03-25 Published:2020-12-28

摘要/Abstract

摘要： 目的为了构建犬小孢子菌FSH1基因的RNA干扰重组质粒，并验证其干扰效率。方法以犬小孢子菌FSH1基因全长cDNA为模板，利用PCR技术扩增FSH1基因，将质粒pUC-PUT进行双酶切使其线性化，插入FSH1正向及反向干扰序列，获得中间载体pUC-PFUFT，将其及质粒pCB-309双酶切后连接，构建干扰载体pCB309-PFULFT。将其转化根癌农杆菌（Agrobacterium tumefaciens）EHA105，获得犬小孢子菌FSH1基因RNA干扰的转化体系。用实时定量PCR方法对犬小孢子菌FSH1基因干扰前后表达量进行鉴定。结果成功构建了FSH1基因的干扰载体pCB309-PFULFT，获得FSH1基因的干扰转化子；犬小孢子菌野生株干扰后FSH1基因mRNA相对表达量较干扰前下降约70%，标准株下降约60%。结论本试验成功构建了犬小孢子菌FSH1基因的干扰载体，为后续研究FSH1基因的功能及在头癣中的发病机制奠定了基础。

关键词: 犬小孢子菌, RNA干扰, 根癌农杆菌, 丝氨酸水解酶1, 头癣

Key words: Microsporum canis, RNAi, Agrobacterium tumefanciens, FSH1, tinea capitis

中图分类号:

R379.2

张芙蓉, 郭春梅, 吴英, 谭灿, 杨国玲. 犬小孢子菌FSH1基因干扰载体的构建及验证[J]. 中国真菌学杂志, 2020, 15(6): 354-358.

ZHANG Fu-rong, GUO Chun-mei, WU ying, TAN Can, YANG Guo-ling. Construction of RNA interference plasmid targeting FSH1 gene in Microsporum canis and interference efficiency determination[J]. Chinese Journal of Mycology, 2020, 15(6): 354-358.

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