白念珠菌FLO8基因突变株构建及鉴定

中国真菌学杂志　 2016, Vol. 11 　Issue (1): 1-7.

论著下一篇

白念珠菌FLO8基因突变株构建及鉴定

李文静^1,2, 刘明¹, 刘锦燕², 史册¹, 王影^1,2, 赵悦^1,2, 项明洁^1,2

1. 上海交通大学医学院附属瑞金医院检验科, 上海 200025;
2. 上海交通大学医学院附属瑞金医院卢湾分院放免检验科, 上海 200020

收稿日期:2015-10-21 出版日期:2016-02-28 发布日期:2016-02-28
通讯作者: 项明洁,E-mail:mjxiang123456@126.com E-mail:mjxiang123456@126.com
作者简介:李文静,女(汉族),硕士研究生在读.E-mail:15000028775@163.com;刘明,女(汉族),本科,主管技师.E-mail:mingliu1962@hotmail.com
基金资助:
上海市科委基金(15ZR1426900);上海市医学重点专科(ZK2012A21);上海市黄浦区优秀青年人才(RCPY1407)

Construction and identification of Candida albicans FLO8 mutations

LI Wen-jing^1,2, LIU Ming¹, LIU Jin-yan², SHI Ce¹, WANG Ying^1,2, ZHAO Yue^1,2, XIANG Ming-jie^1,2

1. Department of Clinical Laboratory, Ruijin Hospital, Shanghai Jiaotong University School of Medicine, Shanghai 200025, China;
2. Radioimmunology and Clinical Laboratory, Luwan Branch, Ruijin Hospital, Shanghai Jiaotong University School of Medicine, Shanghai 200020, China

Received:2015-10-21 Online:2016-02-28 Published:2016-02-28

摘要/Abstract

摘要：

目的构建白念珠菌FLO8基因突变株。方法将白念珠菌FLO8基因插入pCP20质粒载体ADH1启动子之后,通过定向诱变获得FLO8基因R209T、A311T、654Ter、G723R、T751D突变质粒载体,再通过同源重组技术将带有FLO8突变的基因片段整合至SN152flo8/flo8菌株的ADE2位点。结果通过测序鉴定FLO8基因突变质粒载体构建成功;通过PCR验证表明突变FLO8基因整合到SN152flo8/flo8菌株的ADE2位点。结论以pCP20质粒为载体,通过定向诱变、同源重组等技术,可以高效构建白念珠菌FLO8基因突变株。

关键词: 白念珠菌, FLO8基因, 突变株

Abstract:

Objective To construct Candida albicans FLO8 mutations.Methods We inserted Candida albicans FLO8 gene under the control of the ADH1 promoter in pCP20 plasmid,and plasmids containing the point mutations FLO8^R209T,FLO8^A311T,FLO8^654Ter,FLO8^G723R and FLO8^T751D were constructed using site-directed mutagenesis from plasmid pCP20.Then we introduced the inserts with FLO8 point mutations into Candida albicans SN152flo8/flo8 at the endogenous ADE2 gene loci by homologous recombination.Results The plasmids with FLO8 point mutations were constructed successfully by DNA sequencing;The inserts with FLO8 point mutations were exactly recombined to the ADE2 gene loci of Candida albicans SN152flo8/flo8 as confirmed by PCR.Conclusion Candida albicans FLO8 mutations can be efficiently constructed with pCP20 plasmid by site-directed mutagenesis,homologous recombination,etc.

Key words: Candida albicans, FLO8, mutations

中图分类号:

R379.4

李文静, 刘明, 刘锦燕, 史册, 王影, 赵悦, 项明洁. 白念珠菌FLO8基因突变株构建及鉴定[J]. 中国真菌学杂志, 2016, 11(1): 1-7.

LI Wen-jing, LIU Ming, LIU Jin-yan, SHI Ce, WANG Ying, ZHAO Yue, XIANG Ming-jie. Construction and identification of Candida albicans FLO8 mutations[J]. Chinese Journal of Mycology, 2016, 11(1): 1-7.

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白念珠菌FLO8基因突变株构建及鉴定

Construction and identification of Candida albicans FLO8 mutations

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