隐球菌免疫相关的甘露糖受体MR重组腺病毒载体的构建及鉴定

中国真菌学杂志　 2012, Vol. 　Issue (2): 70-72.

隐球菌免疫相关的甘露糖受体MR重组腺病毒载体的构建及鉴定

李平, 温海, 朱红梅, 徐红, 胡婵, 谭宏月

第二军医大学附属长征医院皮肤科, 上海 200003

收稿日期:2012-01-09 出版日期:2012-04-28 发布日期:2012-04-28
通讯作者: 温海,E-mail:wenhai98@sohu.com;朱红梅,E-mail:hmzhu_cn@yahoo.com.cn E-mail:wenhai98@sohu.com;hmzhu_cn@yahoo.com.cn
作者简介:李平,男(汉族),博士研究生在读,主治医师.E-mail:lympin@tom.com
基金资助:
国家自然科学基金(30870106,81071336)

Construction and identification of recombinant adenovirus of mannose receptor gene

LI Ping, WEN Hai, ZHU Hong-mei, XU Hong, HU Chan, TAN Hong-yue

Department of Dermatology, Changzheng Hospital, Shanghai 200003, China

Received:2012-01-09 Online:2012-04-28 Published:2012-04-28

摘要/Abstract

摘要： 目的从巨噬细胞系RAW264.7基因组中扩增甘露糖受体(MR)基因,克隆至穿梭质粒后包装重组腺病毒,以进一步研究甘露糖受体MR基因对树突状细胞参与抗新生隐球菌免疫的影响。方法采用PCR方法以及基因重组方法扩增并克隆巨噬细胞基因组中的MR基因,包装能表达MR蛋白的重组腺病毒。结果从巨噬细胞基因组获得MR全基因,克隆至pShuttle-CMV载体,包装了MR的重组腺病毒AD-MR,并在HEK293细胞中获得了表达。结论成功克隆巨噬细胞MR基因并构建了可表达MR基因的重组腺病毒载体,为进一步研究MR基因在树突状细胞参与新生隐球菌免疫中的作用奠定基础。

关键词: 巨噬细胞, 甘露糖受体, 克隆, 重组腺病毒, 新生隐球菌

Abstract: Objective To clone and construct recombinant adenovirus of mannose receptor(MR) gene from RAW264.7 macrophage cell line.Methods PCR technique and recombination methods were used in cloning and construction recombinant adenovirus of MR gene, Western blot was used to verify the MR protein expressed in HEK293.Results MR gene was amplified from genomic DNA of macrophage and cloned into pShuttle-CMV vector.The linearized pShuttle-CMW plasmid was cotransformed with the pAdEasy-1 vector into the BJ5183 cells,producing the recombination adenovirus which can express the MR protein.Conclusion Successful cloning of MR gene and construction of MR gene expression recombinant adenovirus will be useful for the further research on the functions of MR in Dendritic cells.

Key words: macrophage, MR gene, cloning, recombinant adenovirus, Cryptococcus neoformans

中图分类号:

R379.5

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