PCR-RFLP和多重PCR技术检测常见病原性丝状真菌的实验研究

中国真菌学杂志　 2010, Vol. 5 　Issue (2): 105-108.

PCR-RFLP和多重PCR技术检测常见病原性丝状真菌的实验研究

张晓利¹, 吕雪莲², 沈永年¹, 吕桂霞¹, 王淼淼¹, 葛一平¹, 刘维达¹

1. 中国医学科学院皮肤病研究所, 南京, 210042;
2. 大连皮肤病医院, 大连, 116011

收稿日期:2009-11-15 出版日期:2010-04-28 发布日期:2010-04-28
通讯作者: 刘维达,E-mail:liumyco@hotmail.com E-mail:liumyco@hotmail.com
作者简介:张晓利,女(汉族),博士研究生在读.E-mail:ZXL415@hotmail.com
基金资助:
科技重大专项(2008ZX10004-002);临床重点学科建设项目[2007-2009年度卫生部部属(管)医院临床学科重点项目(第7号)];卫生部公益性行业科研专项经费项目(200802032)

Experimental investigation on the detection of pathogenic molds by PCR-RFLP and multiplex PCR

ZHANG Xiao-li¹, Lü Xue-lian², SHEN Yong-nian¹, Lü Gui-xia¹, WANG Miao-miao¹, GE Yi-ping¹, LIU Wei-da ¹

1. Department of Mycology, Institute of Dermatology, Chinese Academy of Medical Sciemces & Pekinq Union Medical College, Nanjing 210042;
2. Dalian Hospital for Diseases of the Skin, Dalian 116021, China

Received:2009-11-15 Online:2010-04-28 Published:2010-04-28

摘要/Abstract

摘要： 目的建立检测常见丝状真菌感染病原菌的PCR-RFLP和多重PCR方法。方法建立以PCR技术为基础的限制片段长度多态性(RFLP)方法 ,首先用真菌通用引物扩增丝状真菌的ITS区,然后用限制性核酸内切酶对PCR产物进行酶切。用4种丝状真菌的特异性引物建立多重PCR体系,用该体系检测单模板、双模板和三模板的扩增情况,并测定该体系的特异性和敏感性。结果用PCR-RFLP技术能够鉴别5种常见丝状真菌,多重PCR能够根据扩增片段的不同鉴别菌种,在合适的反应条件下,对单模板、双模板和三模板均能扩增出目的片段。结论 PCR-RFLP和多重PCR技术能够快速鉴定丝状真菌感染病原菌,有临床应用的良好前景。

关键词: 丝状真菌, PCR-RFLP, 多重PCR, 分子鉴定

Abstract: Objective To establish diagnositic methods for pathogenic molds using PCR-RFLP and multiplex PCR.Methods A PCR-based restriction fragment length polymorphism method was developed.ITS region of molds was amplified with universal fungal primers,and for RFLP analysis with restriction enzyme.Mutiplex PCR with 4 primer pairs was used to detect 1 template and 2 or 3 template mixtures.Sensitivity and specificity of multiplex PCR were measured.Results PCR-RFLP clearly differentiated the pathogenic molds.Multiplex PCR could amplify the corresponding 1,2 or 3 DNA fragments.Five molds were identified through distinct amplicons.Conclusions PCR-RFLP and multiplex PCR are rapid methods for the identification of pathogenic molds.

Key words: mold, PCR-RFLP, multiplex PCR, molecular identification

中图分类号:

张晓利, 吕雪莲, 沈永年, 吕桂霞, 王淼淼, 葛一平, 刘维达. PCR-RFLP和多重PCR技术检测常见病原性丝状真菌的实验研究[J]. 中国真菌学杂志, 2010, 5(2): 105-108.

ZHANG Xiao-li, Lü Xue-lian, SHEN Yong-nian, Lü Gui-xia, WANG Miao-miao, GE Yi-ping, LIU Wei-da. Experimental investigation on the detection of pathogenic molds by PCR-RFLP and multiplex PCR[J]. Chinese Journal of Mycology, 2010, 5(2): 105-108.

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